style="width:4.79332in;height:0.57896in" /> 本文是学习GB-T 25864-2010 球孢白僵菌粉剂. 而整理的学习笔记,分享出来希望更多人受益,如果存在侵权请及时联系我们
本标准规定了球孢白僵菌粉剂的要求、检验方法及标签、包装、贮运等规则。
本标准适用于球孢白僵菌经生物发酵与加工而获得的分生孢子粉剂。
本标准不适用于布氏白僵菌或其他种类白僵菌生产的杀虫剂。
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有
的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究
是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T 1605—2001 商品农药采样方法
GB 3796—2006 农药包装通则
GB/T 16150—1995 农药粉剂、可湿性粉剂细度测定方法
下列术语和定义适用于本标准。
3.1
球孢白僵菌粉剂 Beauveria powder product
由球孢白僵菌纯菌种经生物发酵生产与加工而获得的分生孢子粉剂。是防治多种害虫的真菌杀
虫剂。
3.2
球孢白僵菌 Beauveria bassiana(Bals.)Vuill.
一种半知菌类的虫生真菌，分类上属于真菌门(Eumycota),
半知菌亚门(Deuteromycotina), 丝孢
纲(Hyphomycetes),
丛梗孢目(Moniliales),丛梗孢科(Moniliaceae),白僵菌属(Beauveria)。
3.3
分生孢子 conidia
一种无性繁殖细胞。着生于分生孢子梗上的瓶状产胞细胞顶端，对昆虫具有致病力。球孢白僵菌
的分生孢子大部分呈球形。
3.4
含孢量 conidia content
每克白僵菌粉剂中所含的分生孢子数。
3.5
孢子萌发率 germination rate of conidia
白僵菌粉剂中所萌发的白僵菌孢子数占孢子总数的百分比。
3.6
毒力测定 bioassay
用杀虫剂感染目标害虫或指示昆虫使其感病死亡，是检验杀虫剂毒力的过程。
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3.7
毒力 virulence
对目标害虫的致死能力，以通过活体生物测定得到的致死中时 LTs 表示。
3.8
干燥减量 loss in weight
样品在规定条件下，经加热干燥后质量减少的百分数，即样品中水分及少量低挥发物的量。
3.9
杂菌率 microbial contaminant
真菌农药中除有效成分真菌外，其他影响有效成分真菌生长的菌占总菌量的百分比。
白色或浅灰白色粉末，不可以有团块。
球孢白僵菌粉剂应符合表1的要求。
表 1 球孢白僵菌粉剂控制项目指标
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按照GB/T1605—2001
中5.1.3"商品农药采样方法"进行，用随机数表法确定抽样的包装件，最终
抽样量不少于100 g。
根据所提供的菌种形态学、生物化学、DNA
分子特征或国际公认机构的鉴定特征，用显微镜观察法
从生物形态上进行鉴定或采用其他(如生物化学、DNA 片段序列)方法进行鉴定。
当对鉴别结果有怀疑或争议时，应到有菌种认证资质的单位，与菌种保藏中心保藏的生产菌株进行
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对照，由2名以上的专家确定后，出具菌种鉴定报告，作为仲裁依据。
本试验采用显微记数法。将粉剂稀释至适当倍数，在显微镜下用血球记数板计孢子数，然后计算含
孢量。
吐温80(化学纯)。
光学显微镜、精度为千分之一的天平、组织捣碎机、血球记数板(16×16)、微量移液器、玻璃器皿等。
用精度为千分之一 的天平准确称取低孢粉1.00 g 或高孢粉0 . 10 g,
装入组织捣碎机的盛液杯中， 同时加入0 . 1 mL 的吐温80、200 mL
清水，以5000 r/min 的速度搅拌2 min, 加清水定容至500 mL, 再以5000 r/min
的速度搅拌1 min, 使之成为均匀的孢子悬浮液。将孢子浓度控制在每中格20~
40个，如果不合适可以稀释样品调节成此浓度。取深度为0.1
mm、血球计数板格为16×16个中格，盖
上配套专用盖玻片，用吸管吸取配制好的悬浮液沿盖玻片的边缘滴入，使孢子液恰好充满盖玻片于载玻
片之间，以孢子液不入槽为度，多余孢子液用滤纸吸去。放在显微镜载物台上静置1
min～2 min,待浮
动的孢子静止后，放大400倍检视计数。
血球计数板记数格为16个中格，每个中格为16个小格，则计算双线范围内任一斜对角线上的四个
中格共64个小格的孢子总数。记数时每中格的四周如有压线的孢子，计上线不计下线，计左线不计右
线。按公式(1)计算待测样品的孢子含量：
式中：
style="width:4.79332in;height:0.57896in" />
……………………
(1)
S—— 含孢量，亿孢子/g;
S₁ ~S— 任意4个中格中孢子的数量；
T—— 稀释倍数。
每个样品设3个重复。允许误差率为10%。
将 5 0 mL
麦芽浸粉培养液(麦芽浸粉2%,用蒸馏水配制)注入预先放入20～30个直径5 mm
玻璃 珠的250 mL 三角瓶中，在121℃条件下灭菌20 min 后，放入待测低孢粉0.2
g (或根据含孢量换算成 适合镜检的克数，高孢粉亦然),置于120 r/min
的摇床上，在25℃条件下培养8 h～16 h(视菌种特性
而定),取样制片镜检。用血球数板计数，芽管大于孢子半径的孢子计为萌发孢子。按公式(2)计算孢子
萌发率：
式中：
R—— 孢子萌发率，%;
N—— 萌发孢子总数；
M—— 检查孢子总数。
style="width:1.85999in;height:0.5533in" />
…………………………
(2)
每个样品设3个重复。允许误差率为10%。
扁形称量瓶(50 mm);
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电热恒温干燥箱(±2℃)。
将扁形称量瓶在110℃干燥箱烘15 min, 取出称量、记录。准确称取5.00 g
样品放入皿内，在 (105±2)℃电热恒温干燥箱中烘1 h。
取出后将样品和扁形称量瓶一起称重，减去扁形称量瓶的重量。
按公式(3)计算干燥减重(含水率):
style="width:1.89996in;height:0.57992in" /> ………………………… (3)
式中：
W— 干燥减重，%;
W 烘干后样品重量，g。
每个样品设3个重复。允许误差率为2%。
5.7.1 采用2%麦芽浸膏、2%营养琼脂配制培养基，121℃高压灭菌20 min
后凉至45℃左右，倒入培 养皿制成2 mm～4 mm 的平板。
5.7.2
按5.3.4中的操作步骤称样、均散、稀释(用无菌水)。稀释倍数依具体情况而定，或同时做几个
稀释梯度，使每个培养皿中的菌落保持在10～20个。
5.7.3 用微量移液器接种100μL
菌液到培养基平板上，用曲玻棒涂布均匀。做10次重复。
5.7.4 在27℃条件下培养48
h,根据菌落特征分辨球孢白僵菌或杂菌，分别计数。计算出杂菌占总菌
落数的百分比。
按照GB/T 16150— 1995 中的2.
1干筛法(适用于粉剂)执行。高孢粉应全部通过160目筛，低孢
粉应全部通过35目筛。
将产品在5℃条件下贮存180 d, 孢子萌发率应大于标明值的80%。
球孢白僵菌粉剂的标志及标签应符合 GB3796—2006
的规定。标签上应注明贮运条件。
产品包装要求应符合GB 3796—2006 的相关规定。
球孢白僵菌粉剂的贮藏应选择低于20℃、干燥、通风、蔽光的场所。有条件的应在5℃条件下保存。
球孢白僵菌粉剂在运输中应密封防潮、防晒、防高温、防雨淋。避免与皮肤、眼睛接触，防止由口鼻
吸入。
产品应采用塑料袋密封包装，以保证干燥减量在10%以下。
在规定的贮运条件下球孢白僵菌粉剂的保证期为6个月。从生产日期算起，至少6个月内孢子萌
发率不低于标明值的80%。
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(规范性附录)
以松毛虫为目标昆虫的毒力测定
A.1 供试虫种
马尾松毛虫 Dendrolimus punctatus Walker
A.2 试剂和材料
麦芽浸粉(生化试剂);
葡萄糖(医用);
吐温80(化学纯);
新洁尔灭(医用)。
A.3 仪器设备
电子秤(千分之一精度);
加湿器(超声波低温加湿器);
养虫笼(由30 cm×30cm×50cm
的木制框架构成，上下两面用木板，四个侧面用窗纱，有一个可
以开关的侧门);
三角瓶(250 mL);
不锈钢镊子(医用)。
A.4 供试幼虫的饲养
A.4.1 蛹的采集
在林间用带有橡皮头的镊子轻轻取下成熟的马尾松毛虫蛹，放入养虫笼内。每笼30只。保持温度
在25℃、相对湿度在80%以上(必要时用加湿器)。
A.4.2 成虫的饲养和产卵
待蛹羽化后，同时放入1只250 mL
三角瓶水培的新鲜马尾松枝，作为成虫产卵的场所。 一般成虫
羽化后，当天或次晚交配，历时7 h 以上可以完成受精并产卵，7 d～10d
为产卵高峰期。卵约7d 开始
孵化。
A.4.3 幼虫的饲养
在孵化高峰期，每天清除虫粪，用新洁尔灭消毒用过的器具，并换上新鲜松枝饲养幼虫。幼虫生长
7 d～10d 以2龄幼虫为主，10 d～15d
以3龄幼虫为主。应选择虫龄一致、生理状态良好的健康幼虫
作为毒力测定的供试幼虫。室内饲养一般不超过4代。
A.5 接种感染
准确称取2.00 g 低孢粉或0.20 g 高孢粉，加入0.1 mL
吐温80,置于高速搅拌器的盛液杯中，加入
1%的麦芽浸粉液200 mL。 以 5 0 0 0 r/min 速度搅拌2 min, 配制成1亿孢子/mL
的待测样品悬浮液。
每个养虫笼放入1只250 mL
三角瓶，装入水，插入新鲜松枝。挑选健康马尾松毛虫3龄幼虫
30头，浸入待测样品悬浮液中2
s,用滤纸吸掉余液，放入已在三角瓶中插好鲜松枝的养虫笼中。每个
样品3次重复。以含有同样浓度吐温80的麦芽浸粉液做对照，3次重复。置于温度在25℃、相对湿度
在80%以上(必要时用加湿器)的环境中培养观察。每天换一次新鲜松枝。
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处理的浓度剂量应不少于5个。每个处理30头试虫，至少重复3次。
A.6 观察记录
接种48 h 后开始检查死亡率，每24 h
记录一次。用镊子轻触虫体，无反应者计为死亡数。对照要
放在另外的房间中，并用单独的镊子。对照的死亡率应小于10%,如果大于10%应重新测定。
A.7 测定结果
根据对照与处理的数据，采用 Abbott 表或按式(A. 1) 计算校正死亡率Y(%):
style="width:2.82004in;height:0.62656in" /> …………… …… (A.1)
式中：
Y——校正死亡率，%;
Y₁—— 药剂处理样本的死亡率，%;
Y。— 对照样本的死亡率，%。
然后，将处理浓度换算成对数值，校正死亡率转换成死亡几率值，用最小二乘法求出样品致死中
时 LTso。
A.8 允许误差
每次平行测定结果之差，应不大于20%。样品各剂量引起的死亡率应在10%～90%之间。测
LTs 时，在50%死亡率上下应至少设置2个时间。
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(规范性附录)
以玉米螟为目标昆虫的毒力测定
B.1 供试昆虫
亚洲玉米螟 Ostrinia furnacalis(Guenee)
B.2 试剂和材料
吐温80(化学纯);
酵母粉(化学纯);
维生素 C (化学纯);
玉米粉(饲料用玉米，80℃烘干，过80目筛);
大豆粉(食用大豆，80℃烘干，过80目筛);
葡萄糖(食用);
氢氧化钾(分析纯);
氯化钠(分析纯);
磷酸氢二钾(分析纯);
磷酸二氢钾(分析纯);
琼脂条(凝胶强度大于300 g/cm², 食品用);
红霉素(医疗注射粉剂);
山梨酸(分析纯);
山梨酸钾(分析纯);
10%甲醛溶液(分析纯，甲醛溶于蒸馏水);
95%乙醇溶液(分析纯);
磷酸缓冲液(氯化钠8.5g;磷酸氢二钾6.0g,磷酸二氢钾3.0 g,吐温802 mL,
蒸馏水1000 mL);
微量移液器(200 mL 微量移液器，对应的灭菌微量移液管);
搪瓷盘(25 cm×40 cm);
组织板(24孔板组织板)。
B.3 仪器设备
光学显微镜；
血球计数板；
水浴锅；
医用手术刀；
磨口三角瓶(250 mL, 具塞);
振荡器(100 r/min～600 r/min);
养虫管(9 cm×2.5 cm);
烧杯(50 mL、500 mL、1000 mL);
试管(18 mm×180 mm);
玻璃珠(直径5 mm);
移液管(1 mL、10 mL);
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带塞磨口试管(10 mL);
玻璃培养皿(9 cm);
不锈钢镊子(医用)。
B.4 玉米螟的饲养
B.4.1 饲料的配制
饲料配方：玉米粉60 g、酵母粉36g、黄豆粉60g、维生素C4.0g、 山梨酸4 .0
g、10% 甲醛1.6 mL、
琼脂20 g、蒸馏水750 mL。
将蔗糖、琼脂粉加入600 mL
的蒸馏水中调匀，搅拌煮沸，使琼脂完全溶化。玉米粉、黄豆粉、酵母
粉用剩余的150 mL 水润湿浸泡。维生素
C、山梨酸钾用少量水溶解。冷却至80℃加入黄豆粉、玉米
粉等的润湿物，搅匀。稍等再将维生素C
和山梨酸钾的混合液加入，搅匀。以微粒不下沉为标准，最后
加入溶化的红霉素和甲醛溶液搅匀，置65℃水浴中，每个养虫管加入5 mL
饲料。凝固后保存于4℃
条件下待用。
B.4.2 饲养
取玉米螟的卵放入养虫盒中，保持温度在27℃±1℃,保持湿度在100%,约3 d
时间孵化出初孵
幼虫。再将初孵幼虫转入已加入饲料的养虫管中，放置在27℃±1℃,湿度在75%～100%的环境中
培养。
B.4.3 供试昆虫的挑选
培 养 5 d 后挑选供试幼虫，选择健康、活跃、个体大小一致的幼虫供试验用。
B.5 待测样品悬浮液的制备
准确称取2.00g 低孢粉或0.2 g 高孢粉，加入0.1 mL
吐温80,置于高速搅拌器的盛液杯中，加入
200 mL1%的麦芽浸粉液。以5000 r/min速度搅拌2 min,配制成1亿孢子/mL
的溶液。
B.6 接虫感染
将选好的幼虫10头一组，放入待测样品悬浮液的中浸2
s,迅速取出，用滤纸吸掉多余水滴。放入
已放置饲料的养虫管中，每处理做5管，塞上棉塞，写好标签。口朝下倾斜放置，27℃±1℃,保持湿度
在75%～100%,感染饲养120 h。
B.7 药效检查
接种24 h
后开始检查死亡率，每天检查一次。用镊子轻触虫体，无反应者计为死亡数。每天检查
一次。记录死亡虫数。应注意先检查对照，并使用单独的镊子。对照的死亡率应小于10%,如果大于
10%应重新测定。
B.8 测定结果
根据对照与处理的数据，采用 Abbott 表或按公式(A.1) 计算校正死亡率Y(%)。
然后，将处理浓
度换算成对数值，校正死亡率转换成死亡几率值，用最小二乘法求出样品致死中时
LTso。
B.9 允许误差
每次平行测定结果之差，应不大于20%。样品各剂量引起的死亡率应在10%～90%之间。测
LTs 时，在50%死亡率上下应至少设置2个时间。
GB/T 25864—2010
(资料性附录)
白僵菌产品分类
C.1 球孢白僵菌产品分类
C.1.1 球孢白僵菌高孢粉
分生孢子含量为1000亿孢子/g
以上、细度是全部通过160目筛的白僵菌菌粉。主要用于防治鳞
翅目害虫。适用于对喷洒物细度要求较高的航空喷洒、静电喷洒等。
C.1.2 球孢白僵菌低孢粉
孢子含量为80亿孢子/g、细度是全部通过35目筛的白僵菌菌粉。主要用于防治鳞翅目害虫。适
用于一般喷粉器。
C.1.3 球孢白僵菌粉炮
通过点燃引捻抛向或发射到空中后点爆扩散的白僵菌粉剂。适用于高山地区和树木较高的林区。
C.1.4 球孢白僵菌油悬浮剂
以油类为介质的白僵菌液体制剂。适用于飞机喷洒。
C.1.5 球孢白僵菌挂条
以无纺布或不同质地的纺织品为载体制成的杀虫产品。主要用于防治鞘翅目害虫。
C.2 布氏白僵菌粉剂
以布氏白僵菌(Beauveria
brongniartii)为生产菌株，经过发酵和加工制成的，分生孢子含量为
50～100亿孢子/g、细度为全部通过35目筛的粉剂。主要用于防治地下害虫。
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